氨基
氨基移換酶也稱轉(zhuǎn)氨酶,它能催化α-氨基酸的氨基與α-酮酸的α-酮基互換,這種作用稱為氨基移換作用。它在生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成與分解等中間代謝中,在糖、脂肪、蛋白質(zhì)三類物質(zhì)代謝的相互聯(lián)系、相互轉(zhuǎn)化上,都起著很重要的作用。任何一種氨基酸進行轉(zhuǎn)氨作用時,都由其專一的轉(zhuǎn)氨酶催化。它們的最適pH接近7.4。在各種轉(zhuǎn)氨酶中,以谷氨酸—草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(簡稱谷草轉(zhuǎn)氨酶、GOT)及谷氨酸—丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(簡稱谷丙轉(zhuǎn)氨酶、GPT)活力最強。
將兔擊暈,迅速解剖,取出肝臟,在低溫條件下剪碎。稱取勻漿后,離心取上清液,即為制備的酶液。體外氨基移換反應(yīng)。紙上層析法檢查每人4個點(標(biāo)準丙氨酸溶液、標(biāo)準谷氨酸溶液、對照上清液、樣品上清液)。點樣放入層析罩內(nèi)。用被酚所飽和的水溶液,平衡后,用帶小漏斗的玻璃管從層析罩上加飽合酚試劑25ml于層析缸內(nèi)。然后,立即蓋緊塞子,當(dāng)溶劑前沿達到距濾紙上端約2.5cm處,取出濾紙,晾干或吹干,以除去酚溶劑,噴灑0.1%茚三酮乙醇溶液,放入烘箱中顯色氨基酸與茚三酮的反應(yīng),在濾紙上呈現(xiàn)紫紅色斑點。